细胞核分离与鉴定中为什么将温度衷-4度

细胞核的分离和鉴定

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细胞核的分离和鉴定

原理：

1

、细胞内各种结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内

其沉降速度也不同，

因此，

可以用差速离心法将细胞内各细胞器和组

分分级分离出来。

2

、分离细胞核的常用方法是将组织制成匀浆，在均匀的悬浮介

质中用特定的离心力进行离心、分离、分析鉴定。

3

、匀浆是指在低温下，将组织快放入匀浆器，加入等剩匀浆介

质进行研磨，破碎细胞，使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆液

步骤：

1

、处死：断头处死小白鼠，手提尾部使腹内血液尽量流出

2

、取材：迅速开腹取肝，在盛有生理盐水的小烧杯中反复

洗涤，取约

1g

的肝组织放在烧杯中

3

、匀浆：加入

8ml

预冷的

0.25mol/L

蔗糖

-0.003mol/L

氯化

钙溶液于烧杯中，剪碎肝组织，将剪碎的肝组织倒入玻璃匀浆

器，使匀浆器下端

寖

如盛有冰块的器皿，将匀浆杆垂直插入管

中匀浆，直至看不见明显的组织块

4

、过滤：用

8

层纱布过滤匀浆液于离心管中

5

、离心：在天平上平衡每对离心管，

2500r/min

离心

15min,

取上清液于另一离心管中，大约剩

1ml

左右上清液。

6

、涂片：取上清液制一张涂片（标记

1

）

。将原离心管中剩

余上清液吹打沉淀成悬液，

另制一张涂片

（标记

2

）

自然干燥。

7

、染色：分别在涂片

1

、

2

上滴加甲苯胺蓝染液，染色

5min

8

、洗涤：冲去染液，晾干。

9

、镜检：显微镜下观察分析。

注意事项：

1

、规范操作，防止试剂污染

2

、细胞悬液的制作要轻柔

3

、使用离心机应注意转速，转速从低到高

结果预测：

低倍镜下找到标本，

再换高倍镜，

可见肝细胞核已游

离出来，被染成蓝紫色，中央有两个或两个以上核仁