为什么有些蛋白质不适合采用疏水层析的原因
蛋白质不适合采用疏水层析的原因一般有两种:
1、一种是疏水性太强,这样的蛋白质有非常强的疏水相互作用,往往容易导致结合上疏水层析后难以被洗脱下来。需要极其剧烈的洗脱条件,可是剧烈的条件由容易造成蛋白变性。所以不适合采用疏水层析。
2、另一种就是疏水性太弱,这样的蛋白质亲水性强,疏水性弱,往往加入一点盐后就容易发生盐析作用。难以稳定的存在于高盐的流动相中,也就不适合采用疏水层析。
疏水层析也称疏水作用下层析(hydrophobic
interaction
chromatography
HIC)从分离纯化生命物质的机制来看,也属于吸附层析一类。疏水层析和反相层析(reversed
phase
chromatography)分离生命物质的依据是一致的,利用固定相载体上偶联的疏水性配基与流动相中的一些疏水分子发生可逆性结合而进行分离。该方法基于的是蛋白质的疏水差异,在高盐溶液中,蛋白质会与疏水配基相结合,而其他的杂蛋白则没有此种性质,利用此种性质,可以将蛋白质初步的分离,用于盐析之后的蛋白质进一步提纯。