构建重组质粒必须使用哪两种酶

限制性核酸内切酶 和 DNA连接酶.

构建重组质粒,

首先,需要把原来完整的质粒切开,就必须要用限制性核酸内切酶；

然后,需要把目的基因片段连接到切开的质粒上,并把重组质粒重新连接好,就必须要用DNA连接酶.