微生物实验

干燥、固定。固定时通过火焰1—2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。

2．染色

（1）初染

加草酸铵结晶紫一滴，约1min，水洗。

（2）媒染

滴加碘液冲去残水，并染色约1min，水洗。

（3）脱色

将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20—30秒钟，立即用水冲净酒精。

（4）复染

用番红液染1—2分钟，水洗。

（5）镜检

干燥后，置油镜观察。革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。

（6）同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。

注意：染色时间要严格控制。关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。