采用cohen方法制备高感受态细胞取决于哪些因素

1、感受态细胞的质量，比如超级感受态比普通感受态转化效率高很多；

2、质粒浓度及质量，连接产物因为质粒浓度低，纯度低转化效率比纯的质粒低很多；

3、转化条件，如热激冷激的温度时间等；

4、活化培养的条件，SOC培养基优于LB培养基；

5、涂布用的培养基及抗生素浓度等。

扩展资料：

制作方法

CaCl?法

1、将快速生长的大肠杆菌置于经低温（0℃）预处理的低渗氯化钙溶液中，便会造成细胞膨胀，同时Ca离子会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来，离开所在区域，诱导细胞成为感受态细胞

细胞膜通透性发生变化，极易与外源DNA相粘附并在细胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基－磷酸钙复合物。

联合其它的二价金属离子（如Mn、Co）、DMSO或还原剂等物质处理细菌，则可使转化率提高100～1000倍。

2、此时，将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激（90s），细胞膜的液晶结构会发生剧烈扰动，并随机出现许多间隙，外源DNA就可能被细胞吸收。进入细胞的外源DNA分子通过复制、表达，实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。

3、将转化后的细胞在选择性培养基上培养，筛选出带有外源DNA分子的阳性克隆。

电转法

电击法不需要预先诱导细菌的感受态，依靠短暂的电击，促使DNA进入细菌，转化率最高能达到109~1010转化子/ug闭环DNA。因操作简便，愈来愈为人们所接受

意义

将构建好的载体转入感受态细胞进行表达，不仅可以检验重组载体是否构建成功，最主要的是感受态细胞作为重组载体的宿主可以进行后续实验，如蛋白质表达纯化等工作。

百度百科-感受态细胞